4 piesārņojuma iemesli PCR eksperimentu laikā

Jan 26, 2022 Atstāj ziņu

Jaunā koronavīrusa uzliesmojuma dēļ PAKĀPENISKI ir paātrinājusies PCR gēnu pastiprināšanas laboratoriju būvniecība dažādās vietās. Vīrusu nukleīnskābes noteikšana ir svarīgs standarts jaunas koronārās pneimonijas diagnosticēšanai. PCR laboratorija, kas pazīstama arī kā gēnu pastiprināšanas laboratorija, pieņem molekulārās bioloģijas tehnoloģiju. Pastiprinot nukleīnskābes fragmentus, to var uzskatīt arī par īpašu nukleīnskābes replikāciju in vitro. Gēnu izsekošanas sistēma tiek izmantota, lai aptvertu vīrusa saturu cilvēka organismā, un noteikšanas precizitāte var sasniegt nanometra līmeni. Jaunā koronavīrusa nukleīnskābes noteikšana pieder arī šai tehnoloģiju kategorijai un ir svarīgs standarts jaunas koronārās pneimonijas diagnosticēšanai.

PCR gēnu pastiprināšanas laboratorija galvenokārt pastiprina noteikšanas nukleīnskābes veidni. Ir redzams, ka laboratorijā, visticamāk, notiks savstarpēja inficēšanās, kā rezultātā testa paraugos rezultāti būs kļūdaini pozitīvi. Tāpēc PCR laboratorijām ir stingras konstrukcijas prasības un standarti.

Tagad PCR tehnoloģija ir plaši izmantota infekcijas slimību, audzēju mērķa, reproduktīvās ģenētikas uc jomās. Tomēr, pateicoties daudzkārtējai un lielai nukleīnskābes amplifikācijai, kas jāpārbauda ar šo tehnoloģiju, pat ļoti neliels piesārņojuma daudzums var viegli novest pie otrās vietas, PCR Tehniskās prasības ir salīdzinoši augstas, un eksperimentālais process ir sarežģīts. Ja starpsaitēs ir izlaidumi, var rasties kļūdaini negatīvi rezultāti.

1. Tas ir PCR pastiprināšanas produktu piesārņojums. Tas ir arī visizplatītākais piesārņojuma cēlonis. Pēc atkārtotas PCR produktu pastiprināšanas replikācijas daudzums ievērojami pārsniedz PCR noteikšanas robežu, tāpēc pat ļoti neliels piesārņojuma daudzums ir pietiekams, lai eksperimentālajos rezultātos radītu viltus pozitīvus rezultātus.

2. Reaģenta piesārņojums. Reaģenta sagatavošanas laikā saskare ar piesārņotiem konteineriem, pipetēm, pipešu galiem, šķīdumiem utt., Var izraisīt reaģentu piesārņojumu.

3. Testējamais paraugs ir piesārņots. Tvertne, kurā ievieto paraugu, ir piesārņota vai paraugs ir piesārņots tvertnes sliktās noslēgšanas dēļ; otrkārt, piesārņotu pipešu vai pipešu uzgaļu izmantošana nukleīnskābes ekstrakcijas procesā izraisīs parauga piesārņošanu; turklāt dažos paraugos ir vīrusi, Ja tos izplata gaisā, var rasties savstarpēja inficēšanās.

4. Aerosola piesārņojums. Ja aerosols satur vīrusus un citus piesārņotājus un izplatās gaisā, ļoti iespējams, ka tas izraisīs PCR produktu piesārņojumu. Aerosolus rada berze starp gaisu un šķidruma virsmu. Atverot vāku, kratot reakcijas cauruli un atkārtoti ieelpojot piesārņojuma paraugu ņemšanas ierīci, var veidoties aerosoli, kas var izraisīt savstarpēju piesārņojumu. Pēc aprēķina viena aerosola daļiņa var saturēt 48 000 daļu, tāpēc īpaša uzmanība jāpievērš aerosola radītajam piesārņojumam. Kamēr PĶR laboratorija ir piesārņota, iepriekšējais rezultātu ziņojums nav derīgs un nevar veikt citas eksperimentālas darbības. Piesārņojuma avots jāidentificē un rūpīgi jānoņem, lai iegūtu precīzus un efektīvus eksperimentālos rezultātus.