Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir viena no vispazīstamākajām metodēm dzīvības zinātnes laboratorijās.
PCR plāksnes ir izgatavotas no pirmās klases plastmasas, lai nodrošinātu izcilu savākto paraugu vai rezultātu apstrādi un analīzi.
Tiem ir plānas, viendabīgas sienas, kas nodrošina precīzu siltuma pārnesi.
Gatavojoties lietošanai reāllaikā, nelielas DNS vai RNS frakcijas tiek izolētas un uzglabātas PCR plāksnēs.
PCR plāksnes ir ļoti efektīvas termiskai blīvēšanai un arī ierobežo siltuma plūsmu.
Tomēr, tā kā PCR plāksnes ir efektīvas un uzticamas, paraugu apstrādē tās ir pakļautas kļūdām un neprecizitātēm.
Tātad, ja jūs interesē labas kvalitātes PCR plates. Vislabāk ir sazināties ar uzticamu PCR plākšņu ražotāju. Izmantojot šo, jūs varat būt pārliecināti, ka iegūsit vislabāko cenu.
Tālāk ir sniegti daži piesardzības pasākumi, lai izvairītos no reaģentu vai paraugu piesārņošanas un lai novērstu neprecīzus rezultātus.
Dezinficējiet vidi
Nepareizi pozitīvi vai negatīvi rezultāti piemaisījumu klātbūtnes dēļ var likt jums šaubīties par rezultātiem.
Piemaisījumi un piesārņotāji ir dažādās formās, piemēram, nesaistītas DNS vai ķīmiskās piedevas, kas galu galā samazina reakcijas efektivitāti un efektivitāti.
Ir daudzi veidi, kā ievērojami samazināt PCR plākšņu piesārņojuma līmeni.
Sterilizētu filtru uzgaļu izmantošana ir vēl viens noderīgs veids, kā novērst piemaisījumu iekļūšanu paraugā caur pipeti.
Pilnīgi tīrs aprīkojuma komplekts, tostarp pipetes un statīvi, ir īpaši paredzēts PCR lietošanai. Tas garantēs nenozīmīgu piemaisījumu vai piesārņotāju pārvietošanos pa laboratoriju.
Izmantojiet balinātāju, etanolu uz pipetēm, statīviem un soliem, lai notīrītu piesārņojumu.
Atvēliet rezervēto vietu visām PCR reakcijām, lai vēl vairāk samazinātu daļiņu piesārņojumu.
Lietojiet tīrus cimdus katrā solī un bieži mainiet tos.
PCR plāksne
Pārbaudiet veidnes koncentrāciju un tīrību.
Jāuztur paraugu analīzei, izmantojot PCR, izmantoto stendu un iekārtu tīrība. Pirms analīzes un apstrādes ir ļoti svarīgi pārbaudīt paraugu tīrību.
Parasti analizators ņem vērā DNS parauga koncentrāciju un tīrības līmeni.
Absorbcijas attiecība 260nm/280nm nedrīkst būt mazāka par 1,8. Pēc tam piemaisījumi tika identificēti, izmantojot viļņu garumus no 230 nm līdz 320 nm.
Vienā piemērā haotropie sāļi un citi organiskie savienojumi tika atklāti pie absorbcijas 230 nm. Vienlaikus noteikt un pārbaudīt duļķainību DNS paraugos pie absorbcijas pie 320 nm.
Izvairieties no PCR plākšņu un produktu pārslodzes
Lai gan ir vēlams vienlaikus darbināt vairākus produktus, tas var izraisīt PCR plākšņu savstarpēju inficēšanos.
PCR plākšņu pārslodze ar dažādiem produktiem ir izšķērdīga un apgrūtina paraugu identificēšanu.
Veiciet PCR reaģentu alikvotu uzskaiti
Nepārtraukti sasaldēšanas/atkausēšanas cikli un bieža alikvotu daļa var sabojāt PCR reaģentus, fermentus un DNTP pārkristalizācijas rezultātā.
Sagatavojot paraugus analīzei, vienmēr centieties uzraudzīt izmantoto alikvotu daudzumu.
Vēlamais LIMS ir vairāk piemērots, lai kontrolētu reaģentu un sasaldējamo vai atkausējamo paraugu krājumus un daudzumus.
Izvēlieties optimālo atkausēšanas temperatūru.
Nepareizas atkausēšanas temperatūras izvēle un izmantošana ir vēl viens veids, kā PCR rezultātos ir kļūdas.
Dažreiz atbilde nenotiek, kā plānots. Atlaidināšanas temperatūra ir jāsamazina, lai veicinātu veiksmīgu reakciju.
Tomēr temperatūras pazemināšana palielina viltus pozitīvu rezultātu un primer-dimēru iespējamību.
Izmantojot PCR plāksnes, ir svarīgi apstiprināt kušanas līknes analīzi, jo tas ir labs rādītājs pareizas atkausēšanas temperatūras izvēlei.
Primer dizaina programmatūra palīdz projektēšanai, nodrošinot pareizu atkausēšanas temperatūru, tieši samazinot kļūdas PCR plāksnēs.
pcr plāksne
