zīdītāju šūnu kultūras process
Zīdītāju šūnas iziet cauri audu ekstrakcijas, primārās kultūras un subkultūras procesam. Subkultūru var iedalīt šūnu līnijas kultūrā un šūnu līnijas kultūrā atbilstoši apstākļiem. Katrs process ir īsi aprakstīts šādi:
Primārā kultūra: pēc tam, kad audi ir izņemti no dzīvnieka, tos sasmalcina, apstrādā ar dažādiem fermentiem (parasti tripsīnu), helātus veidojošiem līdzekļiem (parasti EDTA) un mehāniskām metodēm (atkārtota aspirācija un pipetes pūšana), un pēc tam izkliedē atsevišķās šūnās, kultivē piemērota barotne, kas ļauj šūnām izdzīvot, augt un vairoties. Primārā šūnu kultūra parasti attiecas uz šūnu kultūru 10 pasāžu laikā pēc tam, kad šūnas ir izņemtas no dzīvnieka.
Pēc primārās šūnu kultivēšanas, šūnu dalīšanās un pavairošanas kultūra pakāpeniski palielinās, augšana aizpilda kultūras telpu un pēc tam saskaras viens ar otru, kā rezultātā notiek kontakta kavēšana, un augšanas ātrums pakāpeniski palēninās vai pat apstājas. Tas ir atkārtoti jāiesēj jaunās kultivēšanas kolbās subkultūrai.
Pasāža (pasāža): primārās šūnas izņem no kultivēšanas kolbas, sagatavo šūnu suspensiju un sadala divās vai vairākās kultivēšanas kolbās turpmākai kultivēšanai, ko sauc par subkultūru.
Šūnu līnija: Šūnu līnija ir šūnu līnija pēc pirmās pasāžas primārajā kultūrā. Ja šūnu līnijas izdzīvošanas laiks ir ierobežots, to sauc par ierobežotu šūnu līniju. Šūnu līniju, kas iegūst neierobežotu reproduktīvo spēju un turpina izdzīvot, sauc par nepārtrauktu šūnu līniju vai bezgalīgu šūnu līniju.
Šūnu līnija: no bioloģiski identificētām šūnu līnijām šūnu populāciju, kas izveidota ar atsevišķu šūnu izolāciju, kultūru vai skrīningu, sauc par šūnu līniju. Pēc tam dažādu formu šūnu populācijas tiek izolētas un kultivētas no primārās šūnu līnijas, veidojot subklonus.
Zīdītāju šūnu kultūras apstākļi
Dažādām zīdītāju šūnām katrā posmā ir nepieciešami kultivēšanas pamatnosacījumi
1. Sterila un netoksiska vide: barotnes un visas kultivēšanas iekārtas aseptiska apstrāde; antibiotiku pievienošana barotnei, lai novērstu piesārņojumu kultivēšanas procesā; regulāra barotnes nomaiņa, lai noņemtu metabolītus, lai novērstu kultivēto šūnu bojājumus.
2. Uzturs: Šķidrā sintētiskā barotne satur cukurus, aminoskābes, augšanu veicinošus faktorus, ūdeni, neorganiskos sāļus, mikroelementus utt. Parasti ir nepieciešams pievienot dabīgus komponentus, piemēram, plazmu un serumu.
3. Piemērota temperatūra un pH vērtība: cilvēka un zīdītāju šūnu optimālā temperatūra ir 36±0,5 grādi. Piemērota pH vērtība ir 7.2-7.4.
4. Gāzes vide: Gāzes vide parasti ir "95% gaisa plus 5% oglekļa dioksīda" jaukta gāze. Skābeklis ir gāze, kas nepieciešama šūnu metabolismam, un oglekļa dioksīds uztur barotnes pH.
