PCR astoņu cauruļu komplekta tīrīšanas metode un uzmanības pievēršana

Pēc lietošanas PCR astoņu cauruļu komplekts ir jānomazgā. Ir daži veidi, kā tīrīt PCR Octal Kit. Kam jāpievērš uzmanība, to lietojot?

Eksperimentālās metodes princips: silikagela membrāna saistās ar DNS augsta sāls daudzuma apstākļos un atdalās no DNS zema sāls satura apstākļos. Praimeri, mononukleotīdi, fermenti, minerāleļļa, sāls joni utt. tiek atdalīti DNS saturošajā mazgāšanas šķīdumā, jo tiem nav līdzīgu īpašību kā DNS.

Eksperimentālie materiāli: PCR produkti, reaģenti, komplekti, PCR tīrīšanas komplekti, instrumenti, palīgmateriāli, 96-iedobju DNS sagatavošanas plāksnes, 96-iedobes dziļurbumu plāksnes, 96-iedobes V formas plāksnes

1. PCR astoņu cauruļu ražotājs runā par komplekta sastāvu, uzglabāšanu un stabilitāti

1. Norādījumi, palīgmateriāli: 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksne, 96-iedobes 1,6 ml dziļurbuma plāksne, 96-iedobes V formas plāksne.

2. Bufera PCR-A: DNS saistīšanas šķīdums. Uzglabāt cieši noslēgtu istabas temperatūrā. Ja rodas nokrišņi, pirms lietošanas tie jāizšķīdina siltā vannā 65 grādu temperatūrā un jāatdzesē līdz istabas temperatūrai.

3. Bufera W2 koncentrāts: noņemiet sāls šķīdumu. Pirms lietošanas pievienojiet etanolu līdz tilpumam, kas norādīts uz pudeles, labi samaisa un uzglabā istabas temperatūrā. Var izmantot 100 procentu etanolu vai 95 procentu absolūto etanolu.

4. Eluents: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, uzglabāts noslēgtā stāvoklī istabas temperatūrā.

2. PCR astoņu savienojumu caurulīšu ražotājs stāsta par darbības soļiem

Lietotāji var izvēlēties negatīvu spiedienu vai centrifugēšanu.

A. Negatīvā spiediena metode

1. Pareizi pievienojiet negatīvā spiediena ierīci, novietojiet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni uz negatīvā spiediena ierīces; pievieno 3 reizes bufera PCR-A PCR, fermentu sagremošanai, enzīmu marķēšanas vai sekvencēšanas reakcijas šķīdumam (ja buferšķīdums PCR-A ir mazāks par 100 ul, pievieno 100 ul); labi samaisiet un pārnesiet uz 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni, ieslēdziet un noregulējiet negatīvo spiedienu līdz -25-30 collām Hg un lēnām aspirējiet plāksnē esošo šķīdumu.

2. Pievienojiet 0,3 ml buferšķīduma W2 un absorbējiet šķīdumu. Divreiz nomazgājiet ar 0,3 ml buferšķīduma W2 tādā pašā veidā.

Apstipriniet absolūtā etanola pievienošanu norādītajam Bufera W2 koncentrāta tilpumam uz reaģenta pudeles.

3. Uzturiet negatīvo spiedienu un 10 minūtes ekstrahējiet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni.

4. Sasmalciniet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni 6 reizes garajos šķiedrainajos audos ar drenāžas cauruli uz leju.

5. Novietojiet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni uz 96-iedobes V formas plāksnes, pievienojiet 25-30ul ūdens vai eluātu membrānas centrā un ļaujiet nostāvēties 1 minūti. istabas temperatūrā. DNS tika eluēta, centrifugējot pie 3 000 xg 5 minūtes.

B. Centrbēdzes

1. Pievienojiet 3 tilpumus buferšķīduma PCR-A (ja buferšķīdums PCR-A ir mazāks par 100 ul, pievienojiet 100 ul) PCR, gremošanas, enzīmu marķēšanas vai sekvencēšanas reakcijām; samaisa un pārnes uz 96-iedobes DNS 96-iedobes sagatavošanas plāksnē. Ievietojiet DNS sagatavošanas plāksni 96-iedobē ar 1,6 ml dziļu iedobi, centrifugējiet ar ātrumu 1000 xg 1 minūti un izmetiet filtrātu.

2. 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksnē pievienojiet 0,3 ml buferšķīduma W2, centrifugējiet ar ātrumu 1000 × g 1 minūti un izmetiet filtrātu. Vēlreiz mazgā tādā pašā veidā ar 0,3 ml buferšķīduma W2. Apstipriniet absolūtā etanola pievienošanu norādītajam Bufera W2 koncentrāta tilpumam uz reaģenta pudeles.

3. Novietojiet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni 96-iedobes 1,6 ml dziļās iedobes plāksnē un centrifugējiet ar ātrumu 3 000 × g 10 minūtes.

4. Novietojiet 96-iedobes DNS sagatavošanas plāksni tīrā 96-iedobē V formas apakšējā plāksnē, pievienojiet 25-30ul ūdens vai eluātu membrānas centrā un ļaujiet nostāvēties. 1 minūti istabas temperatūrā. DNS tika eluēta, centrifugējot pie 3 000 xg 5 minūtes.

PCR astoņu cauruļu ražotāji runā par jautājumiem, kuriem jāpievērš uzmanība:

1. Eluenta vai ūdens karsēšana līdz 65 grādiem var palīdzēt uzlabot eluēšanas efektivitāti.

2. DNS molekulas ir skābas, ieteicams uzglabāt 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5 eluātā.