PCR tehnoloģija ir līdzīga DABISKAJAM DNS replikācijas procesam, un tās specifiskums balstās uz oligonukleotīdu praimeriem, kas papildina abus mērķa secības galus. PCR sastāv no trim pamata reakcijas soļiem: denaturēšanas, atkvēlināšanas un pagarināšanas. Šis reakcijas process tiek veikts PCR reakcijas traukā. Nepārtraukti attīstoties gēnu pastiprināšanas instrumentam, reakcijas konteiners ir piedzīvojis arī pakāpenisku centrifūgas mēģenes attīstību no 1,5 ml līdz 0,2 ml (0,25 ml) līdz plānsienu 0,2 ml, kas paredzēts PCR. , 0,1 mlpcr caurule. Palielinoties PCR pastiprināšanas reakciju skaitam, pakāpeniski veidojas augstas caurlaidspējas gēnu pastiprināšanas konteineri PCR sloksnēm un PCR plāksnēm.
PCR sastāv no trim pamata reakcijas soļiem: denaturēšana-atkvēlināšana-pagarināšana
Veidnes DNS denaturēšana:
Pēc tam, kad veidnes DNS noteiktu laiku ir uzkarsēta līdz aptuveni 94 °C, veidnes DNS dubultspirāles DNS vai dubultspirāles DNS, ko veido PCR pastiprināšana, tiek nošķirta, lai to varētu kombinēt ar grunti, lai sagatavotos nākamajai reakcijas kārtai.
Veidnes DNS atkvēlināšana (renaturācija) ar gruntējumiem:
Pēc tam, kad veidnes DNS karsējot denaturējas vienā pavedienā un temperatūra tiek pazemināta līdz aptuveni 55°C, gruntis tiek savienotas pārī ar veidnes DNS vienas virknes papildu secību.
Gruntējumu paplašināšana:
Taq iedarbībā DNS veidnes-gruntēšanas konjugāts izmanto dNTP kā reakcijas izejvielu, lai sintezētu jaunu daļēji rezervētu replikācijas ķēdi, kas papildina DNS veidnes ķēdi saskaņā ar bāzes savienošanas pārī un daļēji rezervētas replicēšanas principu.
PCR tehnoloģijas pamatprincipi
Tehnoloģija balstās uz DNS polimerāzes fermentatīvo sintēzes reakciju veidnes DNS, gruntējumu un četru dezoksiribonukleotīdu klātbūtnē.
DNS polimerāze izmanto vienvirziena DNS kā veidni, lai uzsāktu sintēzi ar nelielu dubultspirāles DNS gabalu. Viens vai divi sintētiskie oligonukleotīdu praimeri ir apvienoti ar papildu sekvenci vienpavediena DNS veidnē, veidojot daļēju dubultspirāles DNS.
Piemērotā temperatūrā un vidē DNS polimerāze pievieno dezoksimononukleotīdu gruntējuma 3'-OH galam un izmanto to kā sākumpunktu, lai paplašinātos gar veidnes 5'→3' virzienu, lai sintezētu jaunu DNS papildu virzienu .
Atšķirība starp PCR caurulēm un centrifūgas caurulēm
PCR caurules:
PCR reakcijas plāksne ir 96 akas vai 384-akas, kas ir īpaši paredzēta partijas reakcijām. Princips ir tāds, ka PCR mašīnas un sekvencera caurlaidspēja parasti ir 96 vai 384.
Centrifūgas caurule:
Centrifūgas caurule ne vienmēr ir PCR caurule. Ir daudz veidu centrifūgas caurules atbilstoši to jaudai. Parasti izmantotie ir 1,5ml, 2ml, 5ml, 15 vai 50ml, un mazāko (250ul) var izmantot kā PCR cauruli.
Kā izvēlēties PCR caurules
Mēs izvēlējāmies novietot PCR caurules, cerot izvēlēties visprecīzāko temperatūras atrašanās vietu.
Visprecīzākajai temperatūras pozīcijai jābūt pozīcijai virs temperatūras sensora zem moduļa (neatkarīgi no sensora neprecīzās temperatūras).
Dažādu PCR instrumentu temperatūras sensora stāvoklis ir atšķirīgs.
Piemēram, AB 2720 vidū ir tikai viens, MJ 200 ir trīs sensori, kas ir apakšējā kreisajā, vidējā un augšējā labajā stūrī, Eppendorf's jābūt A vai H rindā, un Dongshenglong 811 ir trīs temperatūras sensori, jāizvēlas B1-2 , jāizvēlas C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, C11-12, jo šie punkti ir temperatūras punktuāli punkti.
