Kā saka, ja strādnieks vēlas izdarīt labu darbu, viņam vispirms ir jānoasina instrumenti. Palīgmateriālu izvēle ir ļoti svarīga, lai iegūtu apmierinošus PCR eksperimenta rezultātus. Analizējot PCR rezultātus, mēs bieži koncentrējamies uz praimeru, enzīmu koncentrācijas, temperatūras un laika analīzi, taču ignorējam, ka PCR palīgmateriāli arī ir viens no ietekmējošiem faktoriem. Ir daudz veidu PCR palīgmateriālu, kā izvēlēties pareizos PCR palīgmateriālus? Šeit ir daži jautājumi, kas palīdzēs jums atrast atbildi.
pcr palīgmateriāli
1. Kāpēc PCR palīgmateriāli parasti ir izgatavoti no PP?
Neatkarīgi no tā, vai tā ir parasta PCR vai reālā laika fluorescences kvantitatīvā PCR (qPCR), parasti tās palīgmateriāli būs tiešā saskarē ar reaģentiem vai paraugiem, tāpēc ražošanas un sagatavošanas procesā ir nepieciešami augstas kvalitātes materiāli un labas apstrādes metodes. Vispārējie palīgmateriāli ir izgatavoti no polipropilēna (PP). Polipropilēns (PP) ir bioloģiski inerts materiāls, virsma nav viegli pielipusi pie biomolekulām, un tai ir laba ķīmiskā izturība un temperatūras tolerance.
2. Kā izvēlēties dažāda tilpuma PCR mēģenes/plāksnes?
Parastie tilpumi PCR caurulēm/plāksnēm:
• Viena mēģene/{{0}}caurule/12-mēģene: 0.5mL, 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}iedobes plāksne: 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}iedobes plāksne: 0,02 ml
Specifikācijas PCR caurulēm/plāksnēm:
Izvēlieties piemērotu produktu atbilstoši īpašajām eksperimentālajām prasībām. Lielākā daļa PCR mēģenes var atbilst PCR reakciju prasībām. Jaudas specifikācijas ir pieejamas standarta jaudas un zemas jaudas. Parasti vispirms ir ieteicams izvēlēties mazjaudas caurules. Tā kā maza tilpuma reaktora caurulēm/plāksnēm ir mazāks augstums, tiek uzlabota siltuma pārnese un samazināta iztvaikošana. Tajā pašā laikā, pievienojot paraugus, ir jāizvairās no pārāk liela vai pārāk maza parauga pievienošanas. Pārāk daudz var izraisīt siltuma vadītspējas samazināšanos, izšļakstīšanos un savstarpēju piesārņojumu, savukārt pārāk maz var izraisīt parauga iztvaikošanas zudumus.
3. Kāda ir atšķirība starp plakano vāku/izliekto vienas caurules vai 8-rindas caurules vāku?
Ja parauga tilpums ir mazs, priekšroka dodama vienai vai {{0}}mēģenei. Tomēr, ja reakcijas tilpuma prasība ir liela, dominē atsevišķas mēģenes, un tilpums var sasniegt 0,5 ml. Ir divu veidu vienas caurules un 8-caurules ar plakanu vāku un izliektu vāku, un katram ir savas priekšrocības. Plakans vāciņš nodrošina precīzu fluorescējoša signāla piegādi qPCR; viegli rakstīt uz marķieriem. Izliektais vāks saskaras ar PCR instrumenta vāku, lai samazinātu spiediena izraisīto caurules deformāciju; tomēr tas ietekmēs fluorescējošu signālu pārraidi, un to nevar izmantot qPCR eksperimentos.
4. Kādas ir atšķirības dažādu 96-iedobju plākšņu izmantošanas scenārijos?
96-iedobju plāksnes parasti iedala plāksnēs bez apmales, daļēji apliktās un pilnībā apliktās plāksnēs.
Bezsvārku plāksnes: saderīgas ar lielāko daļu termocikleru vai qPCR iekārtu, taču nav piemērotas automatizētām lietojumprogrammām. Pipetēšanas procesa laikā stabilitāte nav augsta, un tā ir jāizmanto kopā ar plāksnes turētāju.
Pussvārku plāksne: to var pielāgot svītrkoda marķēšanai vai uzlikšanai, kā arī automātiskai lietošanai, un tai ir laba pipetes stabilitāte.
Pilna pārklājuma plāksne: ļoti piemērota automatizētām laboratorijas lietojumprogrammām, kā arī piemērota etiķešu un svītrkodu lietojumiem. Laba mehāniskā izturība, piemērota PCR iekārtām ar izvirzītiem moduļiem un augsta stabilitāte pipetes laikā.
5. Vai PCR plāksnes/caurules materiāls ir biezāks un stabilāks?
Nē. PCR palīgmateriāliem jābūt vienādam sieniņu biezumam, lai nodrošinātu pastāvīgu siltuma pārnesi. Īpaši plānā caurules siena ir par 50 procentiem plānāka nekā standarta versija, kas var vēl vairāk samazināt termisko barjeru, kā rezultātā reakcija ir ātrāka un labāka.
6. Kāpēc 96-akas vai 384-akas plāksnēm nogrieztie stūri un etiķetes nav vienādas?
Stūra griešana: PCR plāksnes stūra griešanas pozīcijas izvēle ir atkarīga no pielāgotā instrumenta prasībām vieglai pozicionēšanai.
Identifikācija: Burtciparu marķējumi uz PCR plāksnēm palīdz identificēt atsevišķas iedobes un paraugu atrašanās vietas. Parasti tas ir paaugstināts krāsu skaitļa logotips vai iegravēts logotips. Dažiem automatizētiem pielietošanas eksperimentiem reakcijas plāksne ar iespiestām atzīmēm būs labāk aizzīmogota.
7. Dažas PCR plāksnes iedobes ir izvirzītas uz āru, bet citas ir plakanas. Kurš ir labāks?
Kas ir piemērots, tas ir labs. Parastajām PCR plāksnēm ir divu veidu: plakanas akas malas un paceltas iedobes malas. Reakcijas plāksne ar plakanu akas malu, piemērota lielākajai daļai termociklistu. Reakcijas plāksne stāvvada cauruma malā ir ērta blīvēšanai, kas var samazināt paraugu savstarpējas piesārņošanas risku.
8. Kā izvēlēties dažādu krāsu PCR mēģenes/plāksnes?
Parastām PCR reakcijām var izmantot caurspīdīgas. Reāllaika PCR reakcijā baltās caurules jutība un konsistence ir salīdzinoši augstāka. Baltās caurules sienas neļauj fluorescencei iziet cauri caurules sieniņām un refrakcijai, tādējādi neļaujot fluorescencei pāriet uz sildīšanas moduli, absorbēt moduli vai nekonsekventi atstarot. Salīdzinot ar caurspīdīgām caurulēm, balto lampu augšpusē var savākt spēcīgākus un fokusētākus fluorescences signālus.
