Šūnu kultivēšanas barotnei jāsatur pietiekami daudz barības vielu, lai apmierinātu vielas un enerģiju, kas nepieciešama bioķīmiskām reakcijām, piemēram, jaunu šūnu sintēzei un šūnu metabolismam. Šūnu barotnes galvenās sastāvdaļas ir ūdens, aminoskābes, vitamīni, ogļhidrāti, neorganiskie sāļi un citas palīgvielas. Tāpēc ikdienas eksperimentos mums jāpievērš uzmanība šūnu barotnes sterilizācijas metodei un ar to saistītajiem piesardzības pasākumiem.
šūnu kultūra
1. Sterilizācijas metodes un piesardzības pasākumi dažādām šūnu kultūras barotnēm
Šūnu barotnes sterilizācijas metodes iedala autoklāva sterilizācijā un membrānfiltrācijas sterilizācijā. Dažādām barotnēm var būt atšķirīgas sterilizācijas metodes to atšķirīgo barības vielu dēļ.
Autoklāvs
Dažas barotnes, piemēram, MEM, var tikt autoklāvātas, šīs barotnes parasti nesatur L-glutamīnu un nātrija bikarbonātu, un tās parasti pievieno pēc tam, kad barotne ir autoklāvēta. Turklāt L-glutamīna vietā var izmantot augstspiediena glutamātu (piemēram, L-alanil-L-glutamīnu). Autoklāvējamā barotne ir pilnībā sterilizēta ar minimālu barības vielu zudumu pie 121 grāda, 15 psi un 15 minūtēm, nepagarinot sterilizācijas laiku.
Lielākā daļa šūnu kultūras barotņu nav piemērotas autoklāvēšanai. Tā kā barotne bieži satur vitamīnus, olbaltumvielas, polipeptīdus, augšanas faktorus un citas vielas, šīs vielas ir pakļautas denaturācijai vai funkciju zudumam augstā temperatūrā vai starojuma ietekmē, tāpēc iepriekš minētie šķidrumi lielākoties tiek filtrēti un sterilizēti, lai noņemtu baktērijas. Filtrēšanai un sterilizācijai ir pieejamas daudzas filtru membrānas, un to materiāli galvenokārt ir PES, neilons, polikarbonāts, celulozes acetāts, nitroceluloze, PTFE, keramika utt. Membrānas filtrācijas sterilizācija pašlaik ir plaši izmantota un ērta metode. Bieži tiek izmantotas filtru membrānas ar 0,2 μm poru izmēru, un dažas izmanto 0,1 μm poru izmēru. Salīdzinot ar augstspiediena filtrēšanu, membrānām ir kalpošanas laiks un tās ir dārgākas, taču tās mazāk iznīcina barības vielas šūnu kultūras vidē.
2. Piesardzības pasākumi dažādu šūnu kultūras barotņu uzglabāšanas laikā
Parasti šķidro šūnu kultūras barotni nedrīkst sasaldēt pie -20 grādiem, jo atkausēšanas laikā var izgulsnēties barības vielas, kas ietekmēs kultivēšanas efektu. Normālos apstākļos tas jāuzglabā 2–8 grādu temperatūrā prom no gaismas. Pirms lietošanas izņemiet to no ledusskapja un novietojiet istabas temperatūrā līdzsvaram. Parastā šķidrā barotne ir derīga no 6 līdz 12 mēnešiem. Centieties izvairīties no šķidras šūnu barotnes ilgstošas uzglabāšanas. Tajā esošais glutamīns lēnām sadalīsies, pagarinot uzglabāšanas laiku. Ja šūnu augšana nav laba, varat apsvērt iespēju pārbaudīt glutamīna saturu barotnē, lai noteiktu, vai pievienot glutamīnu. . Tirdzniecībā pieejamai šķidrai šūnu kultūras barotnei ir noteikts derīguma termiņš. Pēc sausa pulverveida šūnu kultivēšanas barotnes izmantošanas šķidruma pagatavošanai, tā arī jāuzglabā zemā temperatūrā (2 ~ 8 grādi). Papildus vieglai glutamīna sadalīšanai barotnē, paaugstinoties temperatūrai, var noārdīties vai izgulsnēties arī citi barotnes komponenti.
